Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日趋扩展

从第一次经常出现肝细胞自身突变到经常出现1改型肝炎临床呕吐的的的发展数万人在幼儿时代就有很好的描述，多个肝细胞自身突变无呕吐的幼儿中的有70%在血清转换后10年内患上肝炎，而随访15年的幼儿这一比重增加到84%。相较之下，占临床1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发病机制还没有人受益充分的数据分析。

越来越多的人开始可用已确定系统对来定义1改型肝炎的的的发展：生物体在经常出现多种肝细胞自身突变时重回第1期中，经常出现摄入量异常时重回第2期中，经常出现呕吐时重回第3期中。一些多发肝细胞自身突变无呕吐的生物体，在1期和2期，的的发展较太快，并的发展为发病的1改型肝炎。我们以后描述了一分组在首次检测到多种肝细胞自身突变抽样后至再加10年无肝炎的极太快的的发展者，这分组症状人数再加，但基本特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原特异性CD8+T细胞膜反应在的的发展快速的症状中的基本上不存在，但在未来会发病和长期存在的肝炎症状中的很容易检测到。这确实暗示，与的的发展症状相较，这些症状神经性反应的调节增强。

早期数据分析暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量正常，但肝炎症状存在一些新功能缺点，其中的除此以外对IL-2的反应技能增加。此外，肝炎症状中的的现像CD4+T细胞膜确实对调节更具抵抗性，表现为现像T细胞膜的诱导消散，自然转化成的Treg和体外转化成的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞膜中的IL-2反应消散。本数据分析的目的是描述了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在大群极快速的的发展者中的的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以人群为基础的纵向数据分析，在21岁表列出确诊的症状亲属中的体检1改型肝炎的危险诱因。我们以后描述了长期快速的的发展者的基本特征，他们持续保持多重肝细胞自身突变无呕吐超过10年，但没有人经常出现肝炎的临床呕吐，太快性或非展开性神经性。随后，10名继续持续保持无肝炎并愿意提供大量血液抽样的快速的的发展者不属于T和B细胞膜新功能系统对性。在现在的数据分析中的，8名太快的的发展者(SP分组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肝细胞自身突变无呕吐。所有的参与者都受制于1改型肝炎的的发展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身突变对某些抗原的无呕吐反应，然而，一名症状已经受制于2期至再加6年，但没有人经常出现临床呕吐，一名症状被检测为肝炎，该患者72岁，在采集实验者抽样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据系统对性中的对该NAD展开了之外评估。剥离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜绝技和T细胞膜诱导试验评估NAD中的Treg的频带、表改型和新功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无监督聚类系统对性，评估Treg表改型。

结果：与肥胖症NAD相较，来自太快的的发展体的失忆CD4+T细胞膜的监督聚类标示出，激已逝的失忆CD4+ Treg频带增加，与持续性诱导的TNFR相关抗原(GITR)传达增加有关。一名HbA1c上升的症状与的的发展快速者和匹配的对照分组相较，Treg谱有所各有不同。新功能系统对性暗示，与肥胖症NAD相较，来自快速的的发展体的Treg细胞内的CD4+现像T细胞膜诱导引人注意受损。表现为对现像CD4+T细胞膜CD25和CD134传达的诱导增加。

绘出1 深入的表改型系统对性标示出，CD4+Treg亚改型在太快的的发展队列中的增加。由FlowSOM生成的Treg室，组织起来在来自所有NAD的已逝CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标上物传达鉴定出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)可用9个各有不同Treg标上生成的10个元簇的MST。每个链表象征性一个集群(100个集群)，较小的元集群(10个元集群)在链表分组附近上色。每个链表中的的饼绘出表示单个标上的传达层次。(b)每个元聚类的热绘出，以标示出整体标上传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)比较丰度为每个metacluster装入直通绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。红色左上角象征性捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 可用CITRUS的预测模改型表明，Treg频带的增加是的的发展快速的标志。分级门控(a - f)和甜菜系统对性(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的象征性性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达展开剥离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及NADSP 606(红色)中的CD25+ cd127的频带概要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装入直通绘出;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列间的各有不同。(j)装入直通绘出标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中的，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比较丰度(比重)。(k)直方绘出标示出每个簇的表改型(粉红色)和Treg标上比较传达与背景传达(橙色);上列，缓存Treg_3;下面即刻，缓存Treg_4。背景与所有其他簇中的标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

绘出3 与肥胖症献血者相较，的的发展快速者失忆treg的GITR增加。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标上的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热绘出(sp606不除此以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中的所有HD(红色)、所有SP(橙色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR传达串联，标示出直方绘出(c)和概要绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(红色)所有NAD除此以外，p< 0.05(橙色)NADSP 606和匹配的HD不除此以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(橙色)和SP 606(红色)串联，标示出直方绘出(e)和概要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

绘出4 来自快速的的发展的CD4+ treg细胞膜控制现像CD4+T细胞膜的技能增加。SP分组用橙色的直通和左上角表示，HD分组用红色的直通和左上角表示，红色的直通/左上角表示NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(；也者)被标上为CFSE, Treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞膜，指导3过后展开流式细胞膜绝技检测。(a-d)与CD4+；也者比较应的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱导比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导比率。可用无呕吐对照(激已逝的响应细胞膜不含treg)计算诱导比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统对性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 现像CD4+T细胞膜对快速的的发展的T细胞膜诱导的诱导更寻常。SP分组用橙色的直通和左上角表示，HD分组用红色的直通和左上角表示，红色的直通/左上角表示NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标上，treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞膜，指导3过后展开流式细胞膜绝技(CD25反染)和细胞膜因子系统对性。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同指导。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱导百分数万人(b)。(c,d) CD25诱导百分数万人(c)和CD134诱导百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统对性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速的的发展子的诱导失忆CD4+Treg在GITR传达中的受益了扩展到和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1改型肝炎风险生物体中的的异质性的必要性。

译者出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28